Resumo das Atividades Laboratoriais- Enzimologia

Estudo cinético da fosfatase alcalina: ação de diferentes tipos de inibidores 

• Notas introdutória; 
• Introdução Teórica; 
• Objetivo da Atividade Laboratorial 
• Reagentes; 
• Cálculos a efetuar para a preparação das soluções (reagentes): 
  • Solução A: Cálculo do volume a medir de enzima
  • Solução A: Cálculo da massa a pesar de albumina
  • Solução B: Cálculo da massa a pesar de p-nitrofenilfosfato (PNFF) 
  • Solução C: Cálculo da massa a pesar de p-nitrofenol (PNF) 
  • Solução D 
  • Solução E
  • Solução F: 
• Cálculos efetuados para a determinação de volumes e concentrações: 
  • Tabela 1 
  • Tabela 2
  • Tabela 3, 4 e 5 
• Cuidados a ter; 
• Conclusões que vamos tirar; 
• Protocolo da atividade prática
  • 1ª parte- Curva de calibração (tabela 1)
  • 1ª parte- Ensaios enzimáticos
  • 1ª parte- Ensaios enzimáticos na ausência de inibidor fosfato-Tabela 2
  • 1ª parte- Ensaios enzimáticos na presença de fosfato- Tabela 3
  • 2ª parte-Ensaios enzimáticos na ausência do inibidor L-fenilalanina- Tabela 4
  • 2ª parte- Ensaios enzimáticos na presença de L-fenilalanina- Tabela 5
• Tratamento de resultados

Determinação da atividade enzimática da β-glucosidase 

• Objetivo
• Introdução
• Determinação da velocidade inicial de hidrólise enzimática da celobiose a 50 °C, V0
• Determinação da concentração de glucose produzida
• Cálculos efetuados para a preparação das soluções
  • 25 ml de solução de NaOH (5M)
  • 200 ml de solução de HCl (5M)
  • 50ml de tampão ácido cítrico/citrato de sódio (tampão citrato), 50 mM, pH 4,8
• Cálculos efetuados para a preparação das soluções padrão de Glucose
  • Solução de glucose 1 mg/mL, v = 10 mL, em tampão citrato
  • Soluções de glucose (μg/ml): 1, 5, 15, 40 e 70. v = 5 mL, em tampão citrato
  • Cálculos efetuados para a preparação das soluções padrão de Celobiose
  • Solução de celobiose 250 mM, v = 25 mL, em tampão citrato
  • Soluções de celobiose (mM): 25, 10, 5 e 2,5. v = 5 mL, em tampão citrato
• Procedimento 
  • Ensaios Enzimáticos
  • Ensaios de controlo

Resumo do documento fornecido pelo professor